Содержание
Список сокращений…………………………………….3
Введение……………………………………………….…4
1. Вирус гепатита группы В………………….5
2. Вирус гепатита группы С………………...11
3. Вирус гепатита группы Е………………...17
Заключение…………………………………………….22
Список использованной литературы………………23
Приложения……………………………………………24
Список сокращений:
АЛТ - аланиновая аминотрансфераза
АСТ - аспарагиновая аминотрансфераза
АТ - аминотрансферазы
ГГТ- гаммаглутамилтрансфераза
ИФА - иммуноферментный анализ
ОВГ - острый вирусный гепатит
ЩФ - щелочная фосфатаза
ХВЗП - хронические вирусные заболевания печени
ХГ - хронический гепатит
ХЗП - хронические заболевания печени
ЦП - цирроз печени
ГЦК - гепатоцеллюлярная карцинома
ПЦР - полимеразная цепная реакция
ИФНa - интерферон альфа
РИБ - рибавирин
Введение
ГЕПАТИТ (Hepatitis) — в общем виде, понятие, характеризующее поражение печени с признаками воспаления; используется для обозначения как самостоятельного заболевания, так и компонента многосистемного, или генерализованного, патологического процесса.
Гепатит классифицируется по многим критериям:
• этиологии (вирусный, токсический);
• длительности течения (острый, подострый, хронический);
• тяжести течения (тяжелый, средней тяжести, легкий);
• локализации поражения (очаговый, мезенхимальный, паренхиматозный) и т. п.
Картина клинических проявлений гепатита многообразна; среди основных его симптомов выделяют желтуху и боли в правом подреберье. Патогистологическая картина во многом определяется природой заболевания. При постановке диагноза гепатита постоянно пользуются данными биохимических анализов крови, мочи и других экскретов больного, а в сложных случаях прибегают к биопсии печени. По мере накопления знаний об этиологии и патологии гепатитов отдельное понятие “гепатит” утрачивает свои Диагностический смысл, уступая место конкретной нозологической форме заболевания, например, гепатит А, гепатит В токсический гепатит, гепатит при желтой лихорадке, гепатит при СПИД'е и т. п.
1. Вирус гепатита группы В
1. Характеристика возбудителя инфекционной болезни:
А) Вирус гепатита В, ВГВ (Hepatitis В virus, HBV) - возбудитель гепатита В, основной представитель семейства гепаднавирусов. ВГВ (частица Дейна) - сферическая частица диаметром 42 нм, состоит из ядра - нуклеоида, имеющего форму икосаэдра диаметром 28 нм, внутри которого находится двуцепочечная ДНК, концевой белок и фермент ДНК-полимераза. В состав нуклеоидного белка - HBcAg входит HBeAg. Внешняя оболочка (толщиной 7 нм) образована поверхностным антигеном вируса гепатита В - HBsAg.
Поверхностный антиген вирусного гепатита В (Hepatitis В surface antigen - HBsAg) - антиген, составляющий наружную оболочку вируса гепатита В (ВГВ). Отличительной особенностью этого антигена является то, что он присутствует в крови больного или вирусоносителя в избытке по отношению к тому количеству, которое необходимо для формирования вириона; у многих лиц концентрация HBsAg в плазме приближается к концентрации нормальных составляющих (белков) этой плазмы. Ранее HBsAg был известен как “австралийский антиген”. HBsAg был открыт в 1963 г. при изучении полиморфизма сывороточных белков человека Б. Бламбергом. Он обнаружил антиген у аборигенов Австралии и антитела к нему у больных гемофилией. Выявленная антиген-антительная система была ассоциирована с гепатитом, который возникал после переливания крови. За это открытие и вклад в изучение вирусных гепатитов Б. Бламбергу в 1976 году присуждена Нобелевская премия.
Б) Вирус гепатита В во многом уникален. Его геном представлен двуцепочечной кольцевой молекулой ДНК — наименьшей из всех ныне идентифицированных ДНК у ДНК-содержащих вирусов. ДНК ВГВ состоит приблизительно из 3200 нуклеотидов, с колебаниями от 3182 до 3221 в различных изолятах вируса. Наружная минус цепь длиннее внутренней плюс цепи - на 15-45%. Минус цепь в двунитевой части имеет разрыв в 5'-конце, к которому ковалентно присоединен белок. В ДНК ВГВ идентифицированы 4 гена (S, С, Р, X) (Табл. 1, приложение 1). Кроме того, в геноме вируса определены регуляторные последовательности ДНК, ответственные за синтез белков и репликацию вируса. Открытые рамки считывания определенных генов частично перекрывают друг друга, что обеспечивает высокую информационную емкость генома ВГВ.
В) На рис. 1 и 2, приложения 2 есть структура и строение вириона.
Г) Идентифицированы три морфологические формы HBsAg: мелкие сферические частицы диаметром 16—25 нм (средний диаметр 22 нм); филаментозные формы — длиной до 200 нм и диаметром порядка 18—20 нм и HBsAg, образующий оболочку частицы Дейна. В сыворотке крови преобладают 22 нм частицы, концентрация которых может достигать 1012—1013 частиц в мл. HBsAg синтезируется в цитоплазме гепатоцитов, где его меньшая часть используется для сборки ВГВ, а остальная секретируется в межклеточное пространство и поступает в кровь.
По химическому составу HBsAg состоит из белков, гликопротеидов, липопротеидов и липидов (до 30 % от общего состава) клеточного происхождения. Плавучая плотность 22 нм частиц — 1,20 г/см3 в градиенте плотности CsCL. Коэффициент седиментации колеблется от 39 S до 54 S, изоэлектрическая точка 22 нм частиц HBsAg варьирует от 3,65 до 5,3. Средняя молекулярная масса — 3,7—4,6 kd. Количество полипептидов, входящих в антиген, от 7 до 9 с молекулярными массами от 25000 до 100000 дальтон, связанных друг с другом дисульфидными мостиками в единый полипептид. В качестве мажорных компонентов HBsAg выступают два самых мелких полипептида, имеющие размеры 25000(р25) и 29000(р29) дальтон. Частица HBsAg состоит из нескольких сотен молекул белка.
HBsAg как основной серологический маркер вируса гепатита В играет ключевую роль в диагностике и изучении этиологии, патогенеза, клиники и профилактики этой инфекции. Так, при установлении этиологического диагноза гепатита В HBsAg может быть первым маркером инфекции и служить одним из основных индикаторов для постановки диагноза. Обнаружение HBsAg у больных хроническими гепатитами и циррозом печени указывает на этиологию заболевания. Выявление HBsAg среди населения продемонстрировало наличие бессимптомных носителей HBsAg, установило их роль как основного резервуара инфекции, определило группы риска . В службе переливания крови отстранение лиц с наличием HBsAg от донорства привело к существенному снижению посттрансфузионых вирусных гепатитов. Образцы крови с наличием HBsAg не должны использоваться в переливании или для изготовления из них препаратов крови. Регламентировано исследование на наличие HBsAg как исходного сырья, так и конечных продуктов, получаемых из крови людей (альбумин, факторы свертывания крови, интерферон и др.).
2. Источники, пути, способы передачи инфекции, особенности эпидемиологии.
Гепатит В встречается чаще всего у взрослых людей (пик заболеваемости приходится на возрастные группы 20–49 лет). Снижения заболеваемости у детей и подростков в развитых странах удалось добиться с помощью регулярной вакцинации. В развивающихся странах Африки и Азии большинство заболевших гепатитом В инфицируется в детстве. При этом вирусом гепатита В может быть заражено до 10% всего населения. В этих регионах рак печени как следствие гепатита В является одной из главных причин онкологической смертности. Погибает до 25% заболевших в детстве.
Источники заражения: места, где собираются лица, употребляющие инъекционные наркотики, в салоны пирсинга и татуажа, парикмахерские (маникюр, педикюр), лечебные учреждения, совместне использование колюще-режущих предметов (маникюрный набор, станки для бритья),
Пути заражения: с кровью или другими биологическим жидкостями больного человека, попадающими непосредственно в кровь инфицируемого, половым путем и от инфицированной матери ребенку во время прохождения его через родовые пути. Считается, что гепатит В - единственная на сегодня инфекция, передающаяся половым путем, от которой можно сделать прививку.
Заражение вирусом гепатита B приводит в большинстве случаев к развитию острого гепатита В. Реже у людей со сниженным иммунитетом или детей, инфицированных в родах, острый гепатит не наблюдается, а заболевание приобретает характер первично-хронического вялотекущего заболевания. Если человек выздоровел, что подтверждается отсутствием HBsAg и наличием в сыворотке крови антител к нему (анти-HBs), то повторное заражение практически невозможно. Риск инфицирования членов семьи невысок при соблюдении правил личной гигиены. Риск заражения выше у здорового супруга, поэтому необходима вакцинация. Члены семьи больного хроническим гепатитом В должны быть обследованы и привиты от гепатита В соответствующей вакциной. Если говорить о географии, то наиболее высока распространенность гепатита В и носителей инфекции в странах Юго-Восточной Азии, тихоокеанского бассейна, Южной Америки (Амазонка), в Центральной и Южной Африке, странах Ближнего и Среднего Востока. Среди близких к нам стран носителей HBsAg больше (8% населения и более) в республиках Средней Азии, Закавказья, Молдавии, согласно данным ВОЗ. Меньше всего носителей и болеющих в Северной Америке, государствах Северной и Западной Европы.
3. Для тестирования HBsAg разработаны и были применены практически все известные методы выявления растворимых и корпускулярных антигенов. При этом основными требованиями, предъявляемыми к этим методам, являются максимальная чувствительность в сочетании с высокой специфичностью, экспрессностью и простотой проведения реакции. Методы выявления HBsAg условно подразделяются по так называемым поколениям: первое поколение — реакция преципитации в геле и ее модификации; второе поколение — реакция встречного иммуноэлектрофореза; реакция связывания комплемента; реакция латекс-агглютинации; метод флюоресцирующих антител; иммуно-электронная микроскопия; третье поколение — реакция обратной пассивной гемагглютинации; радиоиммунный, иммуноферментный анализ с его многочисленными модификациями, такими как иммунофлюоресценция с разрешением по времени , иммуноферментный анализ с использованием прибора 1Мх (фирма “ЭББОТТ”).
Чувствительность применяемых методов для выявления HBsAg колеблется от самой низшей — порядка 5 мг/мл — реакция преципитации в геле, до наивысшей — 0,1—0,5 нг/мл в иммуноферментном и радиоиммунном анализе.
Широкое распространение как в практическом здравоохранении, так и в научных исследованиях нашли методы третьего поколения. Для их проведения многими фирмами как у нас в стране, так и за рубежом выпускаются разнообразные диагностические препараты, различающиеся по чувствительности и специфичности выявления HBsAg. Центральное место при этом занимают диагностические препараты для иммуноферментного анализа из-за их высокой чувствительности, экспрессности, возможности проведения массовых обследований и отсутствия ограничений, необходимых при работе с радиоактивной меткой. Высокая специфичность этих диагностических препаратов обеспечивается обязательным проведением конфирмационного (подтверждающего) теста. Чрезвычайно важным свойством HBsAg является его способность вызывать образование антител (анти-HBs), которые предохраняют от последующего заражения ВГВ. Частицы HBsAg или его полипептиды служат основой для большинства вакцин против гепатита В.
Антитела к ядерному антигену вируса гепатита В класса M (анти-НВc IgM) - маркер активной репликации НВV и острой инфекции. Выявляются через 1-2 недели после обнаружения HBsAg и сохраняются на протяжении 2-18 месяцев. У 4-20 % больных острым гепатитом В анти-HBc IgM являются единственным маркером инфекции. При ХГ В анти-НВс IgM могут быть выявлены у некоторых больных в меньших титрах, чем при острой инфекции, причем титр антител отражает тяжесть гепатита.
4. Способность вступать во взаимодействие с микроорганизмом и реагировать на него как на фактор, нарушающий нормальные физиологические функции, характеризует общую физиологическую реактивность организма. Восприимчивость макроорганизма зависит от места заражения (входные ворота), через которые проникают возбудители. Попадание в макроорганизм микроорганизма-паразита включает сложную цепь защитно-приспособительных реакций, направленных в конечном итоге на устранение возбудителя и восстановление структуры органов и систем организма. Защитные реакции макроорганизма , мобилизируемые при развитии инфекционного процесса, обеспечивают химическое постоянство внутренней среды организма, его генетического и антигенного состава (гомеостаз) и являются частным вариантом адаптивной реакции организма на действие любого повреждающего фактора.
Сопротивляемость организма зависит от непроницаемости нормальных кожных и слизистых покровов для большинства микроорганизмов, наличия бактерицидных субстанций в кожных секретах, кислотности содержимого желудка, присутствия в крови и других жидкостях организма (слюна, слеза и др.) таких ферментных систем, как лизоцим, пропердин и др., от количества и активности фагоцитов крови и тканей.ВведениеОбнаружение антигена. Непосредственное обнаружение антигена в крови не представляется возможным. Это обусловлено малым количеством вирусных частиц в сыворотке больного, не превышающим 105/мл, что ниже предела чувствительности иммунологических методов.
Антитела. В скрининговых исследованиях используют метод ИФА для определения суммарных (IgM+IgG) анти-HCV или анти-HCV класса IgG. Вкачестве подтверждающих тестов применяют иммуноблот на основе рекомбинантных и синтетических пептидов. В типичных случаях анти-HCV появляются в конце инфекционного процесса, т.е. через 4 - 9 мес. после заражения. Однако, в некоторых случаях антитела обнаруживались уже на 2 - 4 неделе после переливания заражённой крови, а в других случаях сероконверсия происходила через год после заражения. В соответствии с тенденцией гепатита С к хронизации - антитела обнаруживаются в течение длительного периода. Учитывая задержку в выработке антител, отрицательный результат исследования на анти-HCV не исключает инфекционности сыворотки. Гепатит С передается с кровью и биологическими жидкостями парентеральным, половым и трансплацентарным путями.
2. По сравнению с другими вирусными гепатитами, гепатит С имеет менее яркую клиническую картину, чаще переходит в хронические формы.
В 20-50% случаев хронический гепатит С приводит к развитию цирроза печени и в 1,25-2,50% - к развитию гепато-целлюлярной карциномы.
С высокой частотой возникают аутоиммунные осложнения.
Показания к назначению анализа: повышение уровня АлАТ и АсАТ; подготовка к оперативному вмешательству; парентеральные манипуляции; подготовка к беременности; клинические признаки вирусного гепатита; незащищенные половые контакты, частая смена половых партнеров; внутривенная наркомания; холестаз.
3. Острая фаза: инкубационный период длится в среднем 6 - 8 нед. (от 2 - 4-х недель до 4 -6 месяцев и более). В этот момент регистрируется первый пик повышения печёночных ферментов. Сероконверсия наступает через 15 - 20 нед. (варьирует от 5 до 50 недель) от момента заражения. РНК вируса с помощью ПЦР определяется через 1 - 3 недели после инфицирования.
Критерии острой фазы: наличие «точки отсчета» по данным эпиданамнеза; синдром острого гепатита при отсутствии указаний на подобные заболевания в прошлом; повышение уровня печеночных ферментов; обнаружение анти-HCV и нарастание их титров при динамическом наблюдении; определение РНК ВГС.
Критерии латентной фазы: наличие в анамнезе указаний на острую стадию; отсутствие клинических проявлении; анти-HCV-IgG в высокихтитрах; анти-HCV-IgM и РНК ВГС не обнаруживаются либо(учитывая характерную черту ВГС - «волнообразность) выявляются в низких концентрациях во время обострения инфекции; во время обострения могут незначительно повышаться уровни печёночных ферментов.
Критерии перехода в фазу реактивации: наличие в отдаленном анамнезе указаний на острую фазу; появление клинических признаков хронического гепатита; повышение уровня печеночных ферментов; закономерное обнаружение в высоких титрах анти-HCV IgG; обнаружение анти-HCV IgM преимущественно в высоких титрах; определение РНК ВГС.
Признаки благоприятного исхода острого гепатита С с выздоровлением: указание на острую стадию в анамнезе; отсутствие клинических проявлений; анти-HCV-IgM исчезают в ранние сроки; регистрируется стойкое отсутствие РНК ВГС; анти-HCV-IgG продолжают циркулировать в крови годы.
Желтуха является хорошим прогностическим признаком. Целесообразно выполнять исследование не ранее 6 недель от момента предполагаемого инфицирования.
4. Известно, что HCV устойчив к нагреванию до 50 Со, но надежно инактивируется растворителями липидов (хлороформом). УФ – облучение также значительно влияет на HCV. Во внешней среде не стоек, однако степень его устойчивости к инактивации значительно выше, чем у ВИЧ [6,7].
5. В отличие от гепатита В, при котором могут быть определены антигены вируса и антитела к ним, при гепатите С методом ИФА улавливаются только антитела. Антигены HCV, если и попадают в кровь, то в количествах, которые практически не улавливаются. Они могут быть обнаружены только в ткани печени при использовании иммунногистохимических методов исследования. Это существенно ограничивает возможность оценки течения и активности инфекционного процесса. Анти-HCV не свидетельствуют о продолжающейся репликации вируса, и могут являться признаком как текущей, так и перенесенной инфекции. Приходится также учитывать, что у реципиентов, которым была перелита инфицированная кровь, могут обнаруживаться анти-HCV донора, не обязательно свидетельствующие о заражении HCV. У больных ХГ С анти-HCV обнаруживаются в крови не только в свободной форме, но и в составе циркулирующих иммунных комплексов.
Для скрининга гепатита С используют метод ИФА, а в качестве подтверждающего теста - метод иммунноблота (RIBA). Существует несколько поколений диагностических тест-систем для выявления анти-HCV, отличающихся своей чувствительностью и специфичностью (таблица 4).
Первая диагностическая тест-система на основе определения антител к С-100-3 была разработана в 1989 году в лаборатории М. Houghton и быстро получила повсеместное распространение. Она позволяла улавливать антитела в зоне, характеризующей всего 12% вирусного белка в неструктурной области (NS3, NS4). Тест-системы 2-го поколения, возникшие в 1991 году, позволяют улавливать антитела к белкам в разных зонах генома не только неструктурной, но и структурной области. Их преимуществом явилась, прежде всего, высокая специфичность, а также возможность более полного представительства спектра антигенов HCV. Использование тест-систем 2-го поколения позволило существенно улучшить отбор доноров и уменьшить угрозу развития посттрансфузионного гепатита С. При использовании тест-систем 2-го поколения также не исключены ложноотрицательные результаты, в частности, у больных с необычными для данного региона генотипами HCV. Наиболее совершенны тест-системы 3-го и 4-го поколения, использующиеся в клинической практике начиная с 1995 года. Тест-системы 3-го и 4-го поколения позволяют выявить анти-HCV в 99,7% случаев. В некоторых случаях антитела к HCV могут не обнаруживаться, например, при запаздывании иммунного ответа, применении иммуносупрессивной терапии или иммуносупрессии на фоне онкологического заболевания, приема наркотических веществ и т.д.
Количественные тест-системы фирмы "Chiron" bDNA Quantiplex, которые позволяют непосредственно оценить концентрацию матрицы в образце по интенсивности регистрируемого сигнала. Эти тест-системы отличаются надежностью, лучшей воспроизводимостью, но более низким уровнем чувствительности, по сравнению с амплификационными.
Обычным методологическим подходом для типирования HCV является обнаружение характерных генетических изменений (мутаций) в консервативных областях вирусного генома - 5' нетранслируемой, Кор, NS5A областях (рис. 4, приложение 2). В ряде крупных диагностических центров типирование HCV проводят по оригинальным методикам, используя ПЦР с типоспецифичными праймерами, рестриктазный анализ фрагментов ДНК (RFLP), или конформационный анализ одноцепочечных фрагментов ДНК (SSCP). Так, в клинико-диагностической лаборатории НПФ "Литех" генотип вируса определяется методом ПЦР-SSCP (рис. 5 ,приложение 2) или аллель-специфичной амплификацией с соответствующими праймерами.
В заключении следует упомянуть о необходимости комплексного обследования больного с привлечением новейших достижений медицинской и биологической науки для правильной диагностики вирусных гепатитов и назначения адекватной терапии больному.
6. Механизмы иммунного ответа при гепатите С – инфекции до сих пор остаются не вполне ясными. Эксперименты на животных показали, что перенесенная гепатит – инфекция не исключает заражения другими штаммами вируса С, что является одной из причин отсутствия вакцины для профилактики этой инфекции. В связи с этим основными методами профилактики гепатита С остаются тщательный контроль препаратов крови и всех биологических препаратов, используемых в медицине, использование одноразовых медицинских инструментов для инвазивных процедур, активная просветительская деятельность.Литература1. Ананьев В. А. Вирусные гепатиты // Общая и частная вирусология / Под ред. В. М. Жданова, С. Я. Гайдамовича. – М.: Медицина, 1982. – Т. 2. – С. 488 – 515.
2. Балаян М. С. Вирусный гепатит ни А, ни В // Успехи гематологии / Под ред. А. Ф. Блюгера. – Рига: Б. и; 1984. – С. 185 – 194.
3. Балаян М. С., Михайлов М. И. Энциклопедический словарь. Вирусные гепатиты. – М.: Амипресс, 1999. – с. 113 – 115.
4. Букринская А. Г. Вирусология. – М.: Медицина, 1986 – 335 с.
5. Дяченко С. С., Синяк К. М., Дяченко Н. С. Патогенные вирусы человека. – Киев: Здоров'я, 1980. – 448 с.
6. Коршунова Г. С. Эпидемическая ситуация по вирусным гепатитам В, С, D в Российской Федерации // Гепатит В, С, D – проблемы диагностики, лечения и профилактики. – М., 1999. – с. 111 – 112.
7. Лобзин Ю. В., Казанцев А. П. Справочник по инфекционным болезням. – Санкт – Петербург: Комета, 1997. – С. 344 – 354.
8. Логвинов А. С., Львов Д. К., Сарафанова Т. И. И др. // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колонопроктол. – 1999. – Т. 1. – с. 21 – 31.
9. Лукина Е. А. Лимфопралиферативные синдромы у больных с хроническим вирусным гепатитом С. // Рос. журн. гастроэнтерол., гепатол., колонопроктол. – 2001. – Т. 11, №4. с. 54.
10. Поздеев О. К. Медицинская микробиология. – Москва: ГЭОТАР – Мед., 2001. С. 459 – 465.
11. Соринсон С. Н. Вирусные гепатиты в клинической практике. – Санкт – Петербург: Теза, 1996. – 300 с.
12. Терминология хронических гепатитов // Лікування та діагностика. – 1996. - №3. – С. 42 – 43.
13. Тимаков В. Д., Левашев В. С., Борисов Л. Б. Микробиология. – М.: Медицина, 1983. – с. 511 – 513.
14. Фролов А. Ф., Шевченко Л. Ф., Широбоков В. П. Практическая вирусология. –Киев: Здоровье, 1989. с. 217 – 225.
15. Филдс Б., Наип Д. Вирусология – М.: Мир, 1989. – Т – 3. – с. 287 – 330.
Дополнительная литература
1. Медицинская микробиология, вирусология и иммунология / Под ред. Борисова Л. Б. и Смирновой А. М.- М.: Медицина, 1994.
2. Медицинская микробиология / Под ред. Покровского В. И.и Поздеева О. К.- М.: ГЭОТАР Медицина, 1998.
3. Государственная фармакопея XI изд., вып. 2. Статьи "Стериализация", "Анализ микробиологической чистоты лекарственных средств".- М.: Медицина, 1994.
|
|
