СодержаниеОглавление
3.Получение ИФА-конъюгатов на основе МКАТ 2
3.1. Основные принципы 2
3.2.Конъюгация пероксидазы хрена (ПХ) с IgG 4
3.3.Конъюгация щелочной фосфатазы с IgG одноэтапным методом с использованием глутарового альдегида 6
3.4. Контроль качества конъюгатов 6
Оборудование и принадлежности 9
Буферы и растворы 9
Технологическая схема получения МКАТ 16
Получение иммуногена 16
Первичный скрининг гибридом в ИФА 16
Клонирование гибридных клеток 17
Получение асцитической мжидкости 17
Список литературы 18ВведениеСамостоятельное приготовление конъюгата антител с фер¬ментом — задача, вполне посильная для любого квалифици¬рованного специалиста. Основное условие ее успешного решения — наличие хорошей гипериммунной антисыворотки, главные критерии качества которой — специфичность и необходимый титр. Остальные этапы довольно просты. Самостоятельно приготовленные конъюгаты, как правило, дешевле коммерческих. Кроме того, некоторые конъюгаты нужной специфичности не выпускаются в виде коммерческих реагентов. При пересылке коммерческих конъюгатов практически всегда существует риск снижения или даже потери их актив¬ности из-за неоптимальных условий при транспортировке или в местах хранения, особенно при доставке в отдаленные от производителя страны.Литература1. Goding J. Monoсlonal antibodies. Principles and practice. Acedemic press, San Diego, 1996.
2. Ніколаєнко І.В. Отримання та порівняльний аналіз гібридом-продуцентів моноклональних антитіл, що диференціюють вакцинні та вірулентні поліовіруси І, ІІ та ІІІ типів: Дисертація ..... канд. мед. наук. - Київ, 1999. - 148 с.
3. Глик Б., Пастернак Дж. Молекулярная биотехнология. Принципы и применение. Пер. с англ. - М.: Мир, 2002. - 589 с.
4. Галкин А.Ю., Николаенко И.В. Гибридомная технология: принцип и применение // Біотехнологія. Освіта. Наука: Тези доповідей учасників I Всеукраїнської науково-практичної конференції студентів, аспірантів та молодих вчених (10-11 лютого 2003 р., м. Київ) / Укл.: І.В.Повстянко, О.Ю.Галкін. – К.: “Видавництво “Політехніка”, 2003. – С.74 – 75.
5. Методичні вказівки до виконання організаційно-економічної частини дипломних робіт для студентів хіміко-технологічних спеціальностей всіх форм навчання / Укл.: В.В. Янковий, М.П. Дорошенко, І.О. Попов. – К.: НТУУ "КПІ", 1999. – 40 с.
6. Смирнов В.В., Сельникова О.П., Думанський В.Д., Мойсеєва Г.В., Гриневич О.Й. Імунобіологічні препарати. Довідник. К.: Моріон, 2001. – 192 с.
7. Фармацевтичний ринок України 2002 / Медичний ринок. – 2003. - №1. – С. 17 - 18.
9. Биотехнология. В 8 кн. / Под ред. Н.С.Егорова, В.Д.Самуилова Кн. 3. Клеточная инженерия. / Р.Г.Бутенко, М.В.Гусев, А.Ф.Киркин и др. – М.: Высш. ш., 1987. – 127 с.
10. Bains W/ Biotechnology from A to Z.IRL Press, Oxford, England, 1998.
11. Goding J. Antibody production by hybridomas. – J. of immunol. Methods, 1980, - V.39. – P. 285-308.
12. Иммунологические методы / Под ред. Х.Фримеля. – М.: Мир, 1979. – 520 с.
13. Антитела. Методы: Кн.1: Пер. с англ. / Под ред. Д. Кэтти.- М. :Мир, 1991. – 287с.
14. Моноклональные антитела. Гибридомы: новый уровень биологического анализа: Пер. с англ. / Под ред. Р.Г.Кеннета. – М. :Медицина, 1987. –416с.
15. Антитела. Методы: Кн.2: Пер. с англ. / Под ред. Д. Кэтти.- М. :Мир, 1991. – 320с.
16. Методы иммунохимического анализа в биологии развития (практическое руководство) / А.Т.Михайлов, В.Н.Симирский. – М.: Наука, 1991. – 288с.
|
